外源表达γ-内酰胺酶菌株的构建及发酵条件优化

我们构建了重组γ-内酰胺菌株E coli BL21/pCDFDuet-γ-lactam,研究了发酵产γ-内酰胺酶的条件并进行了优化.研究结果表明,将pCDFDuet-1表达载体转化到含有γ-内酰胺酶基因的感受态E.coli中,得到重组γ-内酰胺菌株E.coli BL2 l/pCDFDuet-γ-lactam,通过IPTG诱导表达和HPLC检测发现,重组酶可以水解(+)γ-内酰胺,其e.e.值比E.coli BL21/γ-lactam表达提高了约30％.重组菌中(+)γ-内酰胺酶蛋白表观分子量为50kD.对重组菌株发酵条件进行了初步研究,结果进一步表明,当选择碳源葡萄糖5g/L、温度30℃、接种量4％、装液量100 mL/500 mL,转速180 r/min条件下,(+)γ-内酰胺酶含量最高,e.e.值约98％.本研究为探索出一条适合规模化生产的酶催化反应工艺提供参考,该工艺的意义不仅可以节约经济,而且对环境友好,可以替代化学工艺.