橡胶树炭疽菌蛋白激酶A催化亚基基因的克隆及表达

为了解蛋白激酶A (protein kinase A,PKA)在橡胶树炭疽菌(Colletotrichum siamense)的生长发育和致病性中的功能.本研究利用同源克隆法设计引物,采用PCR和RT-PCR的方法获得炭疽菌(C.siamense)的PKA两个催化亚基PKA-C1与PKA-C2,并基于RSF-Duet载体构建两基因原核表达载体,在大肠杆菌Escherichia coli BL21 (DE3)菌株中表达,利用SDS-PAGE检测蛋白表达情况.结果 表明:催化亚基PKA-C1编码498个氨基酸,包含3个内含子;PKA-C2基因编码381个氨基酸,包含2个内含子;两基因均含有丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶催化结构域S TKc和S_TK_X;聚类分析显示两基因与胶孢炭疽菌(C.gloeosporioides)依赖cAMP蛋白激酶催化亚基序列有高度同源性.SDS-PAGE检测表明目的基因在大肠杆菌中可成功表达,大小符合预期.本研究结果为进一步分析炭疽菌的PKA催化亚基基因功能提供了帮助.