哈氏弧菌(Vibrio harveyi) recA基因的克隆与原核表达

SOS 反应不仅能够促使细菌本身产生耐药性,而且与细菌耐药基因的水平转移密切相关.recA 是细菌SOS 反应的重要基因,影响SOS 反应的开启和关闭.本研究以水产养殖经济动物的条件致病菌哈氏弧菌ZJ0603 基因组DNA 为模板,设计同源引物克隆出SOS 基因recA (recombinase A),并对recA 基因进行了生物信息学分析.并构建了recA 基因的原核表达载体PGEX-recA,在大肠杆菌BL21(DE3)中成功诱导表达,对RecA 蛋白的诱导温度、时间、IPTG 浓度等条件进行了优化.结果表明,recA 基因的开放阅读框为693 bp,编码230个氨基酸,RecA 蛋白理论分子量为25.29 kD.重组蛋白表达的优化条件为37℃、0.04 mmol/L IPTG诱导6 h.