内生真菌Shiraia sp. Slf 14中菊粉酶基因的克隆、表达及包涵体复性

Jianying Bao, Bin Liu,Yang Geng,Riming Yan,Zhibin Zhang,Ya Wang,Du Zhu,Huilin Yang

Genomics and Applied Biology（2018）

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摘要

为了实现内生真菌Shiraia sp. Slf 14 菊粉酶基因在大肠杆菌中的高效表达,建立有效的包涵体复性技术,获得有活性的重组菊粉酶,本研究通过提取Shiraia sp. Slf 14 的总RNA,反转录合成cDNA,设计PCR引物扩增出菊粉酶基因,将其克隆至pET-22b (+)载体后转入E. coli BL21 (DE3),利用SDS-PAGE 法检测 IPTG 诱导表达后重组蛋白的表达情况,并进一步检测了包涵体复性及重组酶酶活情况,最终成功获得了相对分子量为62.07 kD 的重组蛋白,成功复性包涵体,复性率为25.23％,重组菊粉酶活力为6.84 U/mL.本研究为活性重组菊粉酶的获得及包涵体复性提供了新的方法和依据.

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关键词

Endophytic fungi,Inulinase,Cloning and expression,Inclusion body,Dialysis renaturation

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