枸杞WRKY2基因的克隆及组织表达分析

WRKY是调控果实发育的一类重要转录因子,在植物的生长发育调节、物质代谢调节等生理活动中发挥重要的作用.以宁夏枸杞果实为材料,利用RACE技术克隆枸杞WRKY基因,采用DNAMAN软件分析核酸和氨基酸序列,构建进化树;通过BLASTn和BLASTp进行相似性分析;采用ExPaSy的SOPMA和Phyre 2软件进行蛋白质二级结构预测与3D结构建模;利用qPCR方法检测Lb WRKY2在果实发育不同时期、不同器官及不同组织的表达特性.结果显示:Lb WRKY2基因(GenBank登录号为KU955318)开放阅读框1 055 bp,编码335个氨基酸.Lb WRKY2蛋白二级结构预测发现不规则卷曲(random coil)结构所占比例最大,为43.28％;α螺旋(alpha helix)次之,比例为32.24％;延伸链结构(extended strand) 19.2％;β-转角(beta turn)最少,仅为5.28％.生物信息学分析显示Lb WRKY2蛋白具有70个氨基酸残基组成的信号肽,与烟草(Nicotiana s ylvestris XP 009798860.1)相似度74％、马铃薯(Solanum tuberosum XP 006339686.1)相似度74％、芝麻(Ses amum indic um XP 011093555.1)相似度48％.Real time QPCR结果显示,Lb WRKY2在枸杞不同的器官中,表达存在差异,在花中的表达量达到最高值,且枸杞果实形成过程的每一阶段Lb WRKY2都有表达,在果实发育第四阶段表达量最高;Lb WRKY2在果实的不同组织中的表达量趋势为:果皮＞种子＞果肉,以上结果表明枸杞Lb WRKY2调控枸杞果实生长发育.