黄芩CHS基因的分子克隆、序列分析及其高效表达载体的构建

黄芩是一种传统的中药,黄芩苷是其重要的药用成分之一,具有广泛的药理作用并被用于多种疾病的治疗,具有巨大的药用价值和经济价值.CHS是催化黄芩苷合成限速步骤的关键酶,其表达量对黄芩苷的积累起关键的作用.本研究利用基因工程的手段,构建黄芩的CHS过表达载体,并将其导入根癌农杆菌中,拟在黄芩中持续表达CHS,促进黄芩苷合成.基于NCBI上公布的黄芩基因信息,设计特异引物,通过RT-PCR技术扩增CHS的cDNA全长序列,并利用生物信息学软件对序列进行分析,在引物两端引入特异酶切位点,将目的序列CHS通过限制性内切酶酶切和连接的方式,构建载体pBI 121-35S-CHS.通过PCR和酶切的方法进行验证,获得黄芩CHS基因的高效表达载体,可直接用于黄芩的遗传转化,使CHS基因表达量增加,促进黄芩苷的合成.