小鼠Iqcf5基因干扰载体的构建及筛选
Genomics and Applied Biology（2016）
Abstract
本试验旨在构建4条针对Iqcf5 (IQ motif containing F5)基因的shRNA干扰载体,并进行有效干扰靶点的筛选,为以后进一步对Iqcf5基因功能的研究奠定基础.提取成年小鼠睾丸组织的RNA,进行反转录,扩增Iqcf5基因的编码区,并将其克隆到真核表达载体HP362-PBL-PBR-CAG-mCherry-WPRE上.设计针对Iqcf5基因的shRNA序列,应用基因重组技术插入到pGPU6/GFP/Neo载体中,将其与Iqcf5基因的真核表达载体共转染293T细胞,进行有效干扰靶点的筛选.构建了Iqcf5基因的真核表达载体和4条针对目的基因Iqcf5的shRNA,分别是Iqcf5-107、Iqcf5-257、Iqcf5-425和Iqcf5-500和一个阴性对照质粒,经测序鉴定正确,共转染293T细胞,经过筛选Iqcf5-257和Iqcf5-500在293T细胞中对Iqcf5基因表达的干扰效果最佳.成功构建了Iqcf5基因的真核表达载体及其shRNA干扰载体,并在工具细胞293T中进行了有效干扰靶点的筛选,这为下一步对Iqcf5基因功能的研究奠定了基础.
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shRNA,Calmodulin,RNAi,Iqcf5
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