实时荧光PCR检测巴西孢子丝菌的实验方法的建立

目的 建立一种快速、特异、灵敏的荧光PCR方法 检测巴西孢子丝菌.方法比对NCBI数据库中所有巴西孢子丝菌内转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)序列,在保守区域设计并合成特异性引物和探针,建立并优化荧光PCR检测方法.对优化后的方法使用标准浓度核酸进行扩增效率、灵敏度及特异度评价.通过巴西孢子丝菌小鼠感染模型,与组织培养比较,对本研究中的方法进行评价.结果 建立的实时荧光PCR方法对巴西孢子丝菌的检测限为100fg.该方法对申克孢子丝菌、球形孢子丝菌、其他常见致病真菌28种、常见细菌3种以及人类基因组和小鼠基因组扩增结果均为阴性,特异度为100％.对巴西孢子丝菌感染小鼠脑、肝、肺、脾、肾及淋巴结检测与培养结果相一致.结论 本研究建立的荧光PCR方法可快速、灵敏、特异地鉴定巴西孢子丝菌,并能够有效的对感染小鼠模型标本进行检测,有助于孢子丝菌病的早期特异性病原学诊断.