靶向ezrin增强子关键区的CRISPR/Cas9载体的构建
Journal of Biology（2017）
摘要
构建靶向人ezrin增强子关键区的CRISPR/Cas9载体并检测其基因敲除功能.设计2个gRNA,分别靶向人ezrin增强子关键区的上、下游.合成gRNA寡核苷酸序列,连接至质粒pX459构建重组质粒pX459-sgRNA-EL和pX459-sgRNA-ER.将鉴定正确的CRISPR/Cas9重组质粒共转染至食管癌EC109细胞中,提取细胞基因组DNA,针对gRNA靶位点两侧进行PCR扩增和亚克隆测序分析.经限制性内切酶酶切和测序鉴定表明,CRISPR/Cas9重组质粒构建正确.在共转染重组质粒的细胞基因组DNA中检测到ezrin增强子关键区的缺失.成功构建了靶向人ezrin增强子关键区的CRISPR/Cas9载体,能够实现目标序列的定向敲除.
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关键词
target knockout,ezrin enhancer,CRISPR/Cas9
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