犬恶丝虫丝氨酸蛋白酶抑制剂特性分析与诊断价值的初步评价

为探究犬恶丝虫丝氨酸蛋白酶抑制剂(Di-Serpin)的生物学特性,初步评价重组蛋白(rDi-Serpin)的诊断价值.本研究扩增犬恶丝虫的Di-Serpin基因片段并经原核表达系统表达该蛋白,经western blot和免疫荧光定位分析rDi-Serpin的免疫反应性以及Di-Serpin在虫体的分布;以纯化的rDi-Serpin为包被抗原,通过间接ELISA评价其诊断价值.结果 显示,Di-Serpin基因片段共编码121个氨基酸,预测蛋白质分子量为13.56ku,等电点为5.06,含有一个Serpin结构域;Di-Serpin主要分布于犬恶丝虫(雌虫、雄虫)的表皮层和肠上皮;以其为包被抗原建立的间接ELISA方法,结果显示:该方法的敏感性和特异性检测结果分别为70％(14/20)和70％(35/50).研究结果表明,犬恶丝虫的Di-Serpin可能为分泌蛋白,在抑制宿主蛋白酶活性,参与抗炎及逃避宿主对虫体的免疫中起重要作用;该蛋白虽有较好的免疫反应性,但其特异性和敏感性均较低,不适合作为犬恶丝虫病的候选诊断抗原.