嵌合猫杯状病毒F9株感染性克隆的构建及病毒拯救
Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine（2019）
摘要
为构建猫杯状病毒(FCV)弱毒株F9的感染性克隆,本研究利经PCR分段扩增了FCV各基因片段,并拼接出FCV F9全基因组序列.经测序显示,其1823位多出一个碱基造成该序列存在移码突变,经替换为pOK-2280(已构建出的FCV强毒株的感染性克隆)相应序列并对差异氨基酸逐个突变,最终获得嵌合FCV F9全基因组的重组质粒pOK-F9H.将线性化的pOK-F9H体外转录,获得的加帽RNA转染F81细胞,得到了拯救病毒rFCV F9.经过对拯救病毒与亲本病毒的蚀斑形成能力、CPE形成能力和多步生长曲线分析,结果显示rFCV F9与亲本株在复制能力和体外生长能力方面基本一致,表明构建了嵌合FCV F9株的感染性克隆并拯救出重组病毒.本研究构建的嵌合FCV F9株感染性克隆可以为FCV的基因功能研究以及新型FCV疫苗的研发奠定基础.
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Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus
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