北美型猪繁殖与呼吸综合征竞争ELISA抗体检测方法的建立及初步应用

为建立快速检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体的ELISA方法,本研究以纯化的PRRSV全病毒为包被抗原,利用抗北美型PRRSV M蛋白的特异性单克隆抗体为竞争抗体,经条件优化,建立了特异性检测北美型PRRSV的竞争ELISA(C-ELISA)方法.结果 显示,最佳抗原包被量为660 ng/孔,待检血清样本稀释度为1∶2,竞争抗体最佳稀释度为1∶8.ELISA结果判定标准:血清样本抑制率PI≥25.65％时判定为阳性,PI＜25.65％判定为阴性.特异性试验结果显示,该方法仅能检测北美型PRRSV,与PRV、PCV2、CSFV、PEDV、TGEV等猪病毒阳性血清无交叉反应;敏感性试验结果显示,该方法能检测出128倍稀释的阳性血清;批内和批间重复性试验的变异系数均小于10％.利用该方法对黑龙江地区收集的546份临床血清样品进行检测,PRRSV抗体阳性率达95.1％,与商品化IDEXX PRRSV试剂盒的符合率为95.8％.本研究建立的C-ELISA方法为PRRS的流行病学调查、临床上疫苗评估及免疫前后抗体水平监测提供了有效的检测手段.