猪伪狂犬病病毒HeN1株gB蛋白单克隆抗体的制备及B细胞线性表位鉴定
Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine（2018）
Abstract
为制备抗猪伪狂犬病病毒(PRV)gB蛋白的单克隆抗体(MAb),本研究将PRV HeN1株全病毒免疫BALB/c小鼠,取免疫后小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,用间接免疫荧光方法筛选,获得了一株稳定分泌抗PRV gB蛋白的杂交瘤细胞株1E7.Westem blot结果显示,MAb 1E7与PRV全病毒和真核表达的gB蛋白均能够反应.阻断ELISA试验显示MAb 1E7与PRV的结合可以被猪阳性血清阻断.抗体亚类鉴定显示MAb 1E7的重链为IgG2b亚类,轻链为kappa链.利用大肠杆菌原核表达系统,表达一系列截短的gB蛋白,最终确定1E7识别的抗原表位是81SAEESLE87.序列分析和western blot结果表明该表位在各PRV病毒株间相对保守.该MAb的制备为建立具有广泛适用性检测PRV野毒感染和疫苗免疫效果评价的阻断ELISA方法奠定了基础.
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