布鲁氏菌DnaK基因缺失株的构建及其功能初步评价

为获得毒力较弱并能够区分自然感染和疫苗免疫的布鲁氏菌候选疫苗株,本研究采用PCR方法扩增布鲁氏菌疫苗株DnaK基因上下游同源臂序列及卡那基因序列,并利用融合PCR将以上基因序列融合,构建pDM 18-T-△DnaK-Kana打靶载体.电转化至布鲁氏菌M5-90感受态细胞,筛选该菌疫苗株M5-90的DnaK基因缺失株,并对获得的M5-90△DnaK遗传稳定性、生长曲线、毒力和细胞免疫指标进行检测.结果表明,M5-90△DnaK与M5-90体外生长曲线相似,M5-90△DnaK在胞内的存活能力显著低于M5-90 (p＜0.05),M5-90和M5-90△DnaK诱导小鼠血清IFN-γ水平相似(p＞0.05),并且均显著高于PBS组(p＜0.01).结果表明,M5-90△DnaK有望成为毒力低且可诱导机体细胞免疫的疫苗候选株.本研究为布鲁氏菌致病机制的研究和疫苗的研发提供科学依据.