猪瘟和猪伪狂犬野毒与其疫苗株多重PCR鉴别方法的建立

为建立一步法鉴别检测猪瘟病毒(CSFV)和猪伪狂犬病病毒-(PRV)野毒株与其疫苗株感染的多重PCR方法(mPCR),本实验通过比对分析GenBank中登录的CSFV和PRV的相关基因序列分别设计可以区分CSFV与PRV及其疫苗株的5对特异性引物,建立了其多重PCR鉴别检测方法.结果表明,建立的多重PCR方法对CSFV和PRV扩增为阳性,而对PCV2、PRRSV、JEV和BVDV扩增结果均为阴性;最低核酸检测量分别为1.7×103拷贝/μL (CSFV野毒株)、9.9×103拷贝/μL(CSFV-C疫苗株)、1.3×103拷贝/L Guizhou-DY)、6.9×103拷贝/μL(Bartha-K61)和5.5×103拷贝/μL (SA215).采用该方法对134份可疑临床样品进行检测,结果表明CSFV和PRV疫苗株与野毒株在能繁母猪、育肥猪、保育猪和哺乳仔猪中的5重感染率分别为2.6％(1/38)、7.7％(2/26)、8.3％(3/36)和8.8％(3/34).本研究建立的多重PCR方法为从病原学方面快速鉴别CSF和PR疫苗毒与野毒提供了新的技术支撑,为规模化猪场实现猪瘟与猪伪狂犬的净化提供一种新方法.