蜜蜂蜂房蜜蜂球菌TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立
Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine（2017）
Abstract
为建立快速检测蜜蜂欧洲幼虫腐臭病(EFB)病原菌蜂房蜜蜂球菌(M.pluton)的方法,本研究根据M.pluton 16S rRNA基因序列,设计并合成特异性引物和TaqMan探针,经反应参数优化,建立了检测M.plutonTaqMan荧光定量PCR方法.结果表明,该方法与其它蜜蜂常见病痛原均无交叉反应;该方法的灵敏度为1.0×101拷贝/μL的阳性质粒,比普通PCR灵敏1 000倍;重复性试验表明该方法的批内和批间变异系数均小于1％.应用该方法对100份实验室模拟样品和150份临床样品进行了检测,与预期结果一致.本研究建立的方法可为蜂及蜂产品中M.pluton的检验检疫提供新的、有效的技术手段.
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Key words
European Foulbrood,Melissococcus pluton,TaqMan real-time PCR
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