猪细小病毒7型SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法的建立

为建立猪细小病毒7型(PPV7)的快速定量检测方法,本研究根据PPV7 (KU563733.1)基因序列设计一对特异性引物,扩增155 bp的PPV7衣壳蛋白基因,构建重组质粒pClon007-PPV7,以其作为标准品建立了PPV7的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法.结果显示,该方法在5.00×109拷贝/μL～5.00×103拷贝/μL范围内呈良好的线性关系.该方法对猪圆环病毒2型、猪繁殖与呼吸综合征病毒、伪狂犬病毒、乙脑病毒、口蹄疫病毒常见病原的检测均无特异性扩增,仅PPV7出现特异性扩增;该方法检测灵敏度可达5.00×101拷贝/μL;批内和批间变异系数均低于1％,具有较高的重复性和稳定性.对临床样品的检测结果显示,所建立的荧光定量PCR阳性检测率为71.88％,比普通PCR法检测的阳性率提高了约4.55％.该研究方法的建立为PPV7提供了一种新的快速定量检测技术.