稳定表达绵羊肺腺瘤病毒受体Hyal-2蛋白细胞系的建立

为构建稳定表达绵羊肺腺瘤病毒(JSRV)受体透明质酸酶-2(Hyal-2)的NIH 3T3细胞系,本研究采用RT-PCR方法从绵羊瘤胃组织总RNA中扩增Hyal-2的cDNA,并引入标签多肽HA序列和限制性内切酶位点,将其克隆至真核表达质粒pcDNA3.1(+)中,构建重组质粒pcDNA-Hyal2-HA.将该重组质粒转染NIH 3T3细胞,并利用G418筛选、纯化,获得了稳定表达JSRV受体蛋白Hyal-2的NIH 3T3细胞系.qPCR、间接免疫荧光及western blot检测结果表明,该细胞系在传代至15代后,Hyal2-HA在NIH 3T3细胞中仍然能够稳定表达,并且主要分布于细胞膜上.JSRV囊膜蛋白诱导细胞转化试验显示,该蛋白的瞬时表达可以导致NIH 3T3细胞出现转化聚积灶,但失去了对稳定表达绵羊Hyal-2蛋白NIH 3T3细胞系的诱导转化作用,其作用机制尚待阐明.该细胞系的建立为进一步研究JSRV与其受体的相互作用致瘤机制奠定了基础.