基于LAMP的好氧反硝化菌筛选及其反硝化性能

为了快捷、精确的筛选海水好氧反硝化菌株,应用专用软件设计了nirS基因、nirK基因和nosZ基因的环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)引物,利用特异性的LAMP反应体系,对候选好氧反硝化菌株进行初筛,再用PCR法、产气检测法进行复筛,并对筛选出的反硝化菌株进行了反硝化性能测试.结果 显示,通过LAMP体系在60℃下反应60 min、GeneFinderTM核酸染料直接染色法对扩增产物进行观察,从好氧培养条件下分离的候选菌株中筛选出KFDX1、KFDX2、KFDX3、KFDX4、KWDX1、FJ3-1和FJ3-2等7株同时含nirS基因或nirK基因和nosZ基因的好氧反硝化菌株初选菌株;PCR的筛选结果与LAMP体系筛选结果一致,经产气检测,其中有6株产气,最终筛选出KFDX1、KFDX2、KFDX3、KWDX1、FJ3-2 5株可产N2的好氧反硝化菌.反硝化性能测试结果表明,24 h后,这5株菌对NO2-N和NO3-N的去除率分别达到99％和90％以上,最大去除速率分别可高达4.9 mg/(L·h)和4.03 mg/(L·h).这对改进反硝化菌株的筛选方法和推动其在废水处理中的应用具有重要意义.