蛋白激发子Hrip1互作蛋白的筛选及其原核表达

蛋白激发子Hrip1是从极细链格孢菌(Alternaria tenuissima)中分离纯化出的一种新型超敏反应诱导蛋白,能激发烟草、拟南芥和水稻等多种植物的免疫防御反应,提高广谱抗病性.为了探究Hrip1诱导植物抗性反应的分子机制,以Hrip1为诱饵蛋白,通过酵母双杂交,在水稻cDNA文库中筛选Hrip1的互作蛋白.经回转验证和x-a-gal染色得到了一个Hrip1互作蛋白-CSN5.构建了互作蛋白CSN5的原核表达载体pGEX-6P-2-CSN5,并转化大肠杆菌表达菌株BL21.经IPTG诱导后获得了可溶性的融合表达蛋白,用GST亲和层析柱纯化获得单一条带的融合表达蛋白,并用Western blot鉴定了融合表达蛋白的正确性.研究结果为进一步鉴定Hrip1的互作蛋白及其功能奠定了基础.