过表达Glypican-3对高转移性肝癌细胞HCCLM3 生物学行为的影响

旨在构建sGPC3/GPC3基因重组真核表达载体,研究过表达sGPC3/GPC3对HCCLM3人高转移性肝癌细胞生物学行为的影响.采用PCR法获得编码sGPC3/GPC3的基因片段并克隆到真核表达载体pcDNA3.0-GFP中,经脂质体介导转染HCCLM3肝癌细胞,RT-PCR和Western blot检测GPC3的表达情况;CCK-8法、克隆平板形成实验、细胞划痕实验、流式细胞术分别检测sGPC3/GPC3对HCCLM3生物学行为的影响.酶切分析、测序鉴定结果表明sGPC3/GPC3基因重组真核表达载体构建成功;RT-PCR和Western blot结果显示sGPC3/GPC3在HCCLM3中成功过表达.与正常组和转染空载体相比,过表达sGPC3/GPC3后,HCCLM3的增殖能力和克隆形成能力均受到明显抑制(P<0.05),迁移率显著下降,细胞周期阻滞于G1期,细胞凋亡率增加.同时,过表达sGPC3对细胞的影响显著优于GPC3(P<0.05).sGPC3/GPC3表达上调抑制高转移性肝癌细胞HCCLM3生长和迁移,促进细胞凋亡以及周期再分布,在高转移性肝癌发生发展过程中起重要作用.