点青霉葡萄糖氧化酶基因的克隆及其酶学性质研究

旨在克隆点青霉菌（Penicillium notatum）中的葡萄糖氧化酶基因（GOD），在毕赤酵母（Phchia pastoris）中异源表达，纯化并研究其酶学性质。利用 PCR 技术从点青霉 No.8312菌株的基因组 DNA 中克隆得到 GOD 基因，将该基因克隆到穿梭载体 pMD-AOX 上并在毕赤酵母 X33中表达，对纯化后的葡萄糖氧化酶的酶学性质进行分析。结果显示，X33-GOD 可高表达具有活性的 GOD，在30℃、pH6.5的条件下，其培养液上清 GOD 酶活可达496 U/mL，比活123.0 U/mg ；重组表达的葡萄糖氧化酶最适温度为40-45℃，最适 pH 为6.0，酶的稳定性研究表明，该酶在 pH3.5-7.0区间和温度低于50℃下稳定。1 mmol/L Zn2+对其有激活作用；Ag+对该酶活性有较大抑制作用。构建出 GOD 的高产毕赤酵母工程菌株，与点青霉 GOD 相比，具有更高的发酵酶活和比活。