类弹性蛋白标签在大肠杆菌周质空间中表达研究

旨在研究类弹性蛋白[I]40（elastin-like polypeptide[I]40，ELP[I]40）在大肠杆菌周质空间的表达。构建表达载体 pIG6LH/ELP[I]40及 pIG6LH/ELP[I]40+Trx，分别将构建的表达载体转化入表达宿主菌 E. coli BLR（DE3），IPTG 诱导表达，采用可逆相变循环（Inverse transition cycling，ITC）技术纯化蛋白。测定 ELP[I]40及 ELP[I]40+Trx 蛋白相变温度（Tt），检测ELP[I]40、ELP[I]40+Trx 蛋白浓度及 NaCl 对相变温度的影响。结果显示，经3轮 ITC 纯化得到了 ELP[I]40、ELP[I]40+Trx蛋白。分别测定 ELP[I]40和 ELP[I]40+Trx 在10、25、50、75和100μmol/L 浓度下的 Tt，其 Tt 依次为31.5℃、29℃、27℃、26℃、25℃和31.8℃、29.5℃、27.5℃、26℃、25.5℃；测定了不同浓度的 NaCl 对 Tt 影响，在 ELP[I]40和 ELP[I]40+Trx 终浓度为25μmol/L，NaCl 浓度为0.25、0.5、0.75、1.00和1.25 mol/L 时，分别使 ELP[I]40的 Tt 由29℃降至24.5℃、22℃、19℃、15℃和11.5℃，使 ELP[I]40+Trx 的 Tt 由29.5℃降至25℃、23℃、20.2℃、15.5℃和11.8℃。在大肠杆菌周质空间表达的 ELP[I]40与胞内表达的具有相同的理化性质，ELP 可作为在大肠杆菌周质空间表达的蛋白质分离纯化标签。