嗜碱芽孢杆菌 cotA 基因克隆表达及部分性质研究

为了获得具有高性能的多铜离子氧化酶，从极端微生物嗜碱芽孢杆菌（Bacillus clausii KSM-K16）中克隆表达了其芽孢外衣蛋白 CotA。根据 B. clausii KSM-K16的 CotA 序列及大肠杆菌密码子的偏爱性，设计和合成出该基因全长序列，构建pET28a-cotA 重组表达载体，将其转化到 Escherichia coli BL21（DE3）并诱导表达出重组蛋白，纯化并研究了 CotA 部分生化特性。重组 CotA 约62 kD，表现出蓝绿色并在波长609 nm 有铜离子特征吸收峰，能氧化 ABTS、SGZ 和胆红素等底物；以 SGZ 为底物，最适 pH 和温度分别为7.5和90℃；在80℃孵育2 h，能保持70%活性；在 pH4-11范围分别孵育1 h，能保持90%活性。结果显示，嗜碱芽孢杆菌 CotA 是一种具有漆酶和胆红素氧化酶活性的典型多铜离子氧化酶，表现出热和酸碱稳定性。