LSPA1早期基因gp22细菌双杂交诱饵载体与筛选文库的建立
Biotechnology Bulletin（2015）
Abstract
构建细菌双杂交系统中的诱饵载体pKT25-gp22和甲型副伤寒沙门氏菌基因文库以便后续的筛选实验.PCR扩增获得gp22基因,插入pKT25构成诱饵质粒pKT25-gp22.提取甲型副伤寒沙门氏菌基因组DNA,经Sau3A Ⅰ部分酶切后连接到pUT18C质粒的BamH Ⅰ位点,获得基因组DNA表达文库.用化转的方法将诱饵质粒与pUT18C共转入BTH101,检测诱饵质粒自激活作用,并检测诱饵蛋白对宿主菌的毒性.将文库质粒电转至JM109感受态,PCR鉴定文库的多样性.诱饵载体pKT25-gp22无自激活报告基因的能力且对细菌的生长无毒性.所构建的副甲基因组文库覆盖基因组达8倍,满足文库筛选需要.成功构建细菌双杂交系统中诱饵载体pKT25-gp22,筛选文库质量良好,可应用于细菌双杂交实验.
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genomic library,bacterial two-hybrid system,bait vector,early gene,Salmonella paratyphi A
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