利用CRISPR/Cas9系统敲除斑马鱼bco1基因与bco1l基因
Asian Journal of Ecotoxicology（2018）
Abstract
β-胡萝卜素-15,15′-加氧酶(β-carotene-15,15′-momoxygenase 1,bco1)是β-胡萝卜素转化成维生素A过程中的关键酶,bco1与bco1l是编码此酶的主要基因.本实验利用CRISPR/Cas9技术敲除斑马鱼的与β-胡萝卜素-15,15′-加氧酶编码相关的基因bco1与bco1l,以便深入开展对斑马鱼bco1的功能研究.分别在斑马鱼bco1与bco1l基因2号外显子选取sgRNA识别位点,体外转录制备sgRNA并与Cas9 mRNA混合对斑马鱼Ⅰ细胞期受精卵进行显微注射,24 h后收集部分胚胎进行PCR检测并将PCR产物进行单克隆测序确定sgRNA的有效性,构建首建鱼,并在此基础上通过PCR检测、凝胶电泳及测序筛选可遗传突变体.本研究分别获得了bco1基因突变与bco1l基因突变,分析表明这些缺失和插入均可导致编码序列的移码,为研究鱼类胡萝卜素代谢及相关发育过程等后续研究提供了材料.
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