基于CRISPR-Cas9系统的HSV-1基因治疗载体的快速构建
Chinese Journal of Biochemistry and Molecular Biology(2017)
Abstract
基因改造的1型单纯疱疹病毒(HSV-1)载体在肿瘤溶瘤病毒治疗及基因转导中具有广泛的应用前景.本研究报道一种基于CRISPR-Cas9系统的高效快速的重组HSV-1载体构建方法.首先,双顺反表达靶点gDNA和Cas9核酸酶的基因编辑质粒与同源重组模板质粒共转染Vero细胞后,用亲本株感染细胞;然后,Cas9对胞内病毒基因组定点切割,诱导外源基因同源重组,修复至病毒基因组指定位点.通过PCR、Western印迹、免疫荧光等方法证明,相比于传统自发同源重组的构建方法,该方法能显著提升病毒重组率(4.1% vs 1.1%).同时,本研究建立了一种新的单克隆病毒纯化方案,简化了阳性病毒筛选步骤.本研究结果提供了一种高效快速的重组HSV-1构建方法,这对于HSV-1相关基因治疗及其病理机制研究将具有重要意义.
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Key words
herpes simplex virus 1 (HSV-1),CRISPR-Cas9 gene editing,homologous recombination,virus vector,gene transduction
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