人降钙素受体胞外域的复性及新的体外活性测定方法
Chinese Journal of Biochemistry and Molecular Biology（2014）
Abstract
人降钙素受体胞外域是降钙素受体的药物靶点区域.本研究截取降钙素受体的N端胞外域22 ～140氨基酸残基区域,依据大肠杆菌偏爱密码子优化并人工合成基因,克隆至pET22b(+)载体,构建的表达质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)中表达.表达产物经复性、纯化后进行受体-配体结合实验.结果表明,目的蛋白质绝大部分以包涵体形式存在.本研究探索出了一套高效的复性方法,经SDS-PAGE鉴定,纯化蛋白质为单一条带,质谱测定蛋白质分子量与理论分子量一致.复性后的蛋白质采用新的体外活性测定方法证实,有较强的结合鲑鱼降钙素(salmon calcitonin,sCT)的能力.这为其进一步的结构与功能研究奠定了基础.
MoreKey words
ectodomain of calcitonin receptor(eCTR),calcitonin,prokaryotic expression,GPCRs
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