重组肝素酶Ⅰ热失活动力学模型的建立与应用
Industrial Microbiology（2014）
Abstract
对组氨酸标签肝素酶Ⅰ(His-Hep Ⅰ,EC 4.2.2.7)的热失活机制进行了研究.针对短暂低温处理可以使热失活His-Hep Ⅰ酶活部分恢复及添加二硫苏糖醇(DTT)使其热稳定性提高的现象,利用荧光探针法研究了失活过程His-Hep Ⅰ构象变化,证明了该酶构象存在可逆转变行为.为进一步明晰His-Hep Ⅰ的热失活机制,假设该酶热失活的主要途径包括去折叠及形成聚集体,并以此为基础建立模型进行拟合,模型与实验值吻合良好,表明假设的合理性.根据模型计算的活化能为Er=100.217 kJ/mol、Eir=7.857 kJ/mol和Ed=77.062 kJ/mol,此数据从一定程度上解释了冷处理为何能使His-Hep Ⅰ部分恢复活性.进一步研究表明,任何能够抑制这两种途径发生的措施对于提高His-Hep Ⅰ热稳定性都是有效的.
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heparinase Ⅰ,thermal stability,enzyme inactivation,kinetics,mathematical model
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