头孢菌素脱乙酰酶的重组表达及固定化
Industrial Microbiology（2014）
Abstract
本文构建了利用trp启动子表达头孢菌素脱乙酰酶(CAH)的重组大肠杆菌DH5α-pCAH.重组菌在7L发酵罐(装液量2L)中发酵28 h,发酵液OD600达到27,产酶313 kU/L发酵液,粗略估算重组蛋白占细胞总蛋白的70％.发酵生产的重组CAH粗酶液经过硫酸铵分级沉淀分离纯化和超滤除盐浓缩两步操作,纯化倍数为1.44,总酶活回收率56％,聚丙烯酰胺凝胶电泳检测纯化后蛋白没有明显杂蛋白条带出现.纯化后的CAH共价结合固定在环氧基载体LX-1000EP(c)上,通过对固定化条件的优化最终得到固定化酶比活443 U/g.该固定化酶重复催化50 mL 5％7-ACA底物100次后,酶活没有降低.
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CAH,biocatalysts,immobilized enzyme,recombinant E.coli,7-ACA
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