A、C、Y、W135群脑膜炎奈瑟菌抗体血清体外杀菌试验方法优化

目的 进一步优化脑膜炎奈瑟菌的血清抗体特异性体外杀菌试验,建立更加标准的A、C、W135、Y群脑膜炎奈瑟菌血清杀菌试验(serum bactericidal assay,SBA)方法,并验证其可行性及稳定性.方法 ①用经典溶血方法测定补体活性,并根据非特异性杀菌率(non-specific killing rates,NSK)筛选出最佳试验补体;②对影响最终菌落数的关键因素,如靶菌起始浓度、培养基、染色剂浓度等进行优化;③根据质控血清的测定结果,确定补体最佳稀释比例和孵育时间;④对优化后的方法进行准确性、线性和精密度验证.结果 补体选用Pel-freez-11536,溶血活性约为400 U/mL,除C血清群靶菌孵育时间需在45 min以内,其余血清群靶菌NSK均≤25％;对数期A、C、W135、Y血清群脑膜炎奈瑟菌做靶菌的最佳起始浓度为A600 nm的菌液分别稀释105、105×2、105×4、105×4倍;4种血清群脑膜炎奈瑟菌在BHI+0.5％血平板培养基上生长正常,且培养基颜色较浅,染色效果较明显;4种血清群靶菌的染色剂TTC最佳添加量均为0.001％;补体最佳用量为1:3稀释,活性单位约133 U/mL;最佳孵育时间除C血清群为45 min外,其余血清群均以60 min为宜;优化后的方法测定质控血清的稀释倍数与对应的SBA滴度呈显著负相关,斜率在-1.1～-0.9之间,Pearson相关系数在-1.0～-0.9之间,P<0.001,多次试验的CV均<15％.结论 对传统的SBA方法进行了优化,建立了更具有可比性、重复性较好的简单、可行、稳定的SBA方法.