不同脊髓灰质炎病毒株3CD蛋白酶在昆虫细胞中的表达及其对P1前体蛋白的剪切

目的 获得在昆虫细胞中有效表达脊髓灰质炎病毒P1基因和3CD基因的重组杆状病毒,为制备脊髓灰质炎病毒样颗粒疫苗提供了科学依据.方法 将I型脊髓灰质炎病毒( Mahoney株) 的P1基因和3CD基因构建到供体质粒中,通过flashBAC ULTRATM系统制备重组杆状病毒;将Mahoney株的P1基因与Sabin株Ⅲ 型的3CD基因组合,用同样方法构建重组杆状病毒.通过接种昆虫细胞草地贪夜蛾细胞( sf-9细胞) 对两种病毒进行扩增,再接种昆虫细胞粉纹夜蛾细胞( High five细胞) 扩大培养,并通过定量PCR对P1和3CD基因的表达进行验证,利用Western blot检测P1蛋白的表达及被3CD蛋白酶剪切的情况.结果 获得了两株稳定表达脊髓灰质炎病毒P1和3CD基因的重组杆状病毒.其中,重组杆状病毒( BacU-Mahoney-P1-3CD) 在感染细胞后,3CD蛋白酶表达量较低,不能有效剪切P1前体蛋白;而重组杆状病毒( BacU-Mahoney-P1-Sabin PV3 3CD) 感染细胞后,3 CD蛋白酶的表达量和对P1前体蛋白的剪切效力都有明显提高( P＜0.05).结论将Mahoney株P1基因和Sabin株Ⅲ 型的3CD基因的组合构建重组杆状病毒,可有效地在昆虫细胞中表达P1和3CD基因,并且Sabin株Ⅲ 型的3CD蛋白酶可有效地剪切Mahoney株的P1前体蛋白.