11群肺炎链球菌荚膜多糖合成相关基因的分子生物学研究

目的 利用分子生物学方法,研究7株11群肺炎链球菌荚膜多糖合成相关基因(cps loci).方法 根据11群肺炎链球菌荚膜多糖合成相关基因设计合成5对特异性引物,以7株肺炎链球菌基因组DNA作为模板进行PCR扩增,并对扩增产物进行序列测定及基因序列比对,确定其血清型.多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)技术分析7株11群肺炎链球菌序列型(ST).采用相邻合并分析(neighbour-joining analysis),根据MLST的7个管家基因和cps基因分别绘制系统发育树.结果 根据wcwC、gct和wcjE等3个基因产物确定5株原11A型肺炎链球菌为11A型,无11E型;根据wcwR和gct等2个基因产物确定2株原11B型肺炎链球菌为11B型.获得7株不包括4个合成调控基因(wzg、wzh、wzd和wze)的11群肺炎链球菌cps loci,长度为11～12 kb,11A型具有12个开放式阅读框(ORF),11B型具有11个ORF.5株11A型肺炎链球菌部分cps基因序列差异较大;2株11B型肺炎链球菌部分cps基因序列相似性高于99％.根据MLST分析发现3种新的ST型.根据MLST的7个管家基因绘制的系统发育树和cps基因绘制的系统发育树差异很大.结论 从分子水平上确定了11A和11B血清型.获得了5株11A型和2株11B型肺炎链球菌ST型和部分荚膜多糖合成相关基因(cps loci),完善了11群肺炎链球菌的菌种档案.