肠道病毒71型抗原ELISA定量检测方法的建立及应用

目的 建立肠道病毒71型(EV71)抗原ELISA定量检测方法,用于EV71疫苗生产工艺中抗原定量检测.方法 选取抗EV71单克隆抗体作为包被抗体,HRP标记抗EV71多克隆抗体作为酶标二抗,建立EV71抗原ELISA定量检测方法.该方法经系统验证后,应用于定量检测2BS及Vero细胞基质EV71疫苗生产工艺过程样品的抗原含量.结果 验证结果显示,该方法的线性范围为3.125 ～50.000 U/mL,样品回收率为92.0％～110.0％,变异系数小于8.8％;孵育时间及温度在一定范围内偏差的样品回收率为100.8％～113.8％;检测其他肠道病毒中抗原其A值均小于cut-off值;试剂于37℃孵育3d后的检测样品回收率为101.4％ ～ 112.4％;2BS及Vero细胞基质EV71疫苗生产工艺过程样品的适用性检测中,抗原回收率为92.1％～114.9％.结论 建立并验证EV71抗原ELISA定量检测方法,其准确度、精密度、耐用性均优良,特异性强、稳定性好,适用于不同细胞基质的EV71疫苗及多价手足口病疫苗生产工艺过程的质量控制.