dCas9-gRNA在卡介苗侵染小鼠巨噬细胞过程中rab7的调控作用

[目的]分析rab7及其下游相关分子rilp和rep1在卡介苗侵袭巨噬细胞过程中的作用.[方法]利用CRISPR-ERA在线设计鼠源rab7-gRNA序列,构建dCas9调控质粒,比较调控前后rab7、rilp和rep1的mRNA表达量.[结果]成功设计3条rab7-gRNA,构建重组调控质粒pX330S-2-dCas9-gRNA-T2A-EGFP;BCG感染后,巨噬细胞内rab7及其下游的rilp和rep1的mRNA水平明显上升(P＜0.01);gRNA1调控后,rab7及下游rilp的mRNA水平明显下降(P ＜0.05;P ＜0.01);gRNA3调控后,rab7及rilp mRNA水平有所下降,但无统计学意义(P＞0.05).gRNA1和gRNA3调控对rep1 mRNA水平无明显影响(P＞0.05).[结论]在BCG侵染巨噬细胞过程中,rab7作为晚期吞噬体的标志受到dCas9调控后变化明显,rilp作为rab7的下游效应分子,表达水平与rab7的变化一致,而repl未见明显变化.三者在MTB寄生过程中的作用还有待深入研究.