NF-κB1基因干扰质粒的构建及其对DEV增殖的影响

[目的]探究NF-κB对DEV增殖是否有影响.[方法]以NF-κB1基因作为靶基因, 设计并构建4个不同p GPU6/GFP/Neo shRNA表达载体, 通过荧光显微镜法观察转染后细胞荧光密度和RT-PCR检测转染细胞NF-κB1基因转录水平以筛选最佳干扰质粒, 分3种不同组别进行干扰实验后, 以荧光定量PCR法检测DEV-NP基因表达变化.[结果]所构建的重组质粒p GPU6/GFP/Neo-NF-κB1-2对细胞NF-κB1基因的干扰效率最高, 可达78. 77％;除先感染后干扰组对DEV增殖影响不大外, 先干扰后感染组与同时感染和干扰组均对DEV增殖呈现出一定的抑制作用, 其中先干扰后感染组在第72 h时的沉默效率最高, 可达78％, 而同时感染和干扰组于第48 h时的沉默效率最高, 可达82％.[结论]RNA干扰下调NF-κB1基因会抑制DEV增殖.