重组蛋白ApSerpin-FA72的包涵体复性及活性研究

[目的]原核表达及制备重组光滑鳖甲丝氨酸蛋白酶抑制剂(ApSerpin-FA72),探索包涵体最优复性条件与最适酶反应条件.[方法]采用超声破碎获得大量包涵体,通过包涵体的洗涤、包涵体的溶解方法对包涵体进行纯化,获得高纯度的包涵体进行复性液成分与复性方法的摸索.测定TrxA-ApSerpin-FA72对胰蛋白酶的IC50、最适反应pH和最适反应温度.[结果]在32 ℃、180 r/min、0.4 mmol/L IPTG浓度下以沉淀形式表达大量蛋白,通过包涵体复性在含有L-精氨酸复性液中获得有生物活性的TrxA-ApSerpin-FA72,对胰蛋白酶的IC50为0.48 μmol/L,pH在7～9,温度在60℃时有较高的抑制活性.[结论]L-精氨酸是复性液中重要的组成部分,复性的重组蛋白TrxA-ApSerpin-FA72对胰蛋白酶有较强的抑制能力,是一种热稳定较好的弱碱性胰蛋白酶抑制剂.