转录因子LRF蛋白POZ结构域的表达与纯化

[目的]旨在原核表达转录因子LRF的POZ结构域,纯化获得GST-POZ融合蛋白.[方法]以SD大鼠海马组织cDNA为模板,利用PCR扩增带有EcoRⅠ和XhoⅠ酶切位点的LRF基因的POZ结构域,并将其插入到原核表达载体pGEX-4T-1中,将构建成功的pGEX-4T-1-POZ原核表达质粒转化到大肠杆菌BL21 (DE3),用IPTG诱导融合蛋白表达,再利用MagneGST particles亲和纯化GST-POZ融合蛋白,最后通过Western Blot鉴定融合蛋白.[结果]pGEX-4T-1-POZ原核表达质粒构建成功;在37℃条件下,浓度为0.2 mmol/L的IPTG诱导7h能够使重组蛋白大量表达,经MagneGST particles纯化后的GST-POZ重组蛋白能够被识别LRF的抗体特异性识别.[结论]纯化后的GST-POZ重组蛋白能够用于后续的生物学研究.