人胱抑素C参考物质制备方法的建立

[目的]建立重组人胱抑素C(cystatin C)表达体系,获得可溶、稳定、高纯度的胱抑素C.[方法]密码子优化并人工合成人胱抑素C编码序列,与麦芽糖结合蛋白(MBP)分别克隆至PRSF-Duet载体以构建重组人pMBP-CYSCPRSF表达质粒.使用大肠杆菌E.coli BL21(DE3) pLysS对其进行诱导表达,SDS-PAGE鉴定蛋白纯度和分子量,全自动生化仪测定纯化蛋白浓度及稳定性.[结果]成功构建重组人pMBP-CYSC PRSF表达质粒并诱导表达,胱抑素C蛋白浓度可达500 mg/L,纯度可达90％,在4℃和-20 ℃储存条件下监测64w,胱抑素C蛋浓度稳定,均在允许相对偏差5％以内.[结论]通过密码子优化,成功获得浓度为500 mg/L、纯度为90％、存储稳定性至少达到64w的胱抑素C蛋白,可充分满足该产品诊断试剂制备的需求.