茶尺蠖EoGST534的原核表达及体内表达特征

[目的]研究茶尺蠖(Ectropis oblique) EoGST534原核表达,及其在溴氰菊酯处理下的体内表达规律.[方法]进行EoGST534生物信息学分析,将重组质粒pET-32a-EoGST534转化大肠杆菌BL21中,诱导表达并纯化,将重组蛋白进行酶活测定.使用不同浓度的溴氰菊酯处理茶尺蠖,使用qRT-PCR检测目的基因表达量.[结果]成功表达目的蛋白,大小约为40 kDa.其最适温度为50℃,最适pH为10.5时酶活为7.32 U/mg.使用溴氰菊酯处理不同龄期的幼虫.在IC50浓度溴氰菊酯处理不同龄期幼虫12 h后,2、3、4龄幼虫EoGST534表达量显著降低.而3、4龄幼虫EoGST534表达量在处理后24h后升高,其表达量变化分别约为20倍和26倍.在IC25浓度溴氰菊酯处理12 h后,EoGST534在2龄及3龄幼虫中表达量均显著降低.而在处理24 h后,4龄幼虫EoGST534表达量显著增加约10倍.[结论]原核表达了重组EoGST534,并测定了其最适条件酶活为7.32 U/mg.初步研究了其在溴氰菊酯处理的茶尺蠖体内EoGST534表达量变化规律.