大肠杆菌ybfE基因的三种原核质粒表达水平的对比及蛋白纯化

[目的]构建大肠杆菌功能未知基因ybfE的pET16b、pET32a和pGEX-4T-1三种原核表达系统,通过对比表达水平筛选出最优表达体系,并纯化表达的可溶性YbfE融合蛋白.[方法]使用pET16b、pET32a和pGEX-4T-1表达质粒构建pET16b-ybfE、pET32a-ybfE和pGEX-4T-1-ybfE原核表达载体,分别转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达YbfE融合蛋白,对三种表达系统的表达水平进行对比,并对pET16b-ybfE和pGEX-4T-1-ybfE表达体系的裂菌上清中的可溶性YbfE融合蛋白液分别使用镍柱和GST蛋白纯化柱纯化.[结果]构建了pET16b-ybfE、pET32a-ybfE和pGEX-4T-1-ybfE原核表达体系,并使用IPTG诱导表达ybfE融合蛋白.ybfE在pGEX-4T-1载体内的表达水平最高,接下来依次为pET16b和pET32a.pET16b-ybfE和pGEX-4T-1-ybfE表达的可溶性YbfE融合蛋白纯化后浓度分别为86 μg/mL和724 μg/mL.[结论]成功构建了ybfE基因的三种原核表达系统,筛选出最佳表达体系,可溶性YbfE融合蛋白得到纯化.