RBM5荧光原位杂交探针的制备及应用

[目的]研究RBM5(RNA-binding motif protein 5)荧光探针的制备方法,确立RBM5荧光探针用于肺癌组织检测的原位杂交技术体系.[方法]以RP11-493K19菌株为材料,提取含有RBM5的质粒进行PCR验证,采用缺口平移法制备RBM5荧光探针,并与人肺癌组织石蜡切片进行杂交实验建立肺癌荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)的检测体系.[结果]RBM5 15℃标记12h可获得合适的探针,探针与样本杂交后样本细胞内出现清晰明亮的绿色荧光信号,通过与呈橘红色荧光信号的CEP-3探针比较,可以判断肺癌细胞是否存在RBM5的缺失.[结论]RBM5探针制备的最佳条件是15℃标记12h,FISH实验的参数为10 μg/ml蛋白酶K处理样本100 min、探针与样本37℃杂交16h、2×SSC/0.3％ NP-40洗涤杂交样本5min.该实验体系适用于肺癌组织RBM5的FISH检测.