人骨钙素真核表达载体构建及蛋白表达纯化

[目的]在毕赤酵母真核表达系统中获得人骨钙素(hBGP)蛋白以便用于2型糖尿病新药研究.[方法]人工合成hBGP基因并克隆入真核载体pPIC9K,转化毕赤酵母GS115,0.5％甲醇诱导表达,优化表达时间,实现hBGP的真核表达.获得的目的蛋白经离子交换层析和分子筛等进行纯化,用Tricine-SDS-PAGE检测蛋白表达情况及纯化结果,并以Western blot进行验证.[结果]酶切及基因测序结果显示成功构建了pPIC9K-BGP真核表达载体,经Tricine-SDS-PAGE及Western blot测定均检测到分子量为5.8kDa的目的条带,表明hBGP在毕赤酵母中成功表达并纯化.[结论]构建的pPIC9K-BGP真核表达载体能在毕赤酵母中成功表达分子量为5.8kDa的hBGP蛋白,经纯化后目的蛋白纯度在95％以上.