人抑癌基因PTEN的原核表达载体的构建及融合表达

BIOTECHNOLOGY（2005）

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摘要

为研究抑癌因子PTEN蛋白的抑癌机理,构建了PTEN cDNA的原核表达载体并进行融合表达.将含有PTEN cDNA的质粒pMD-PTEN经EcoRI和Sal Ⅰ双酶切,回收PTEN基因片段与经相同酶切的高效原核表达载体pET-44a连接,经序列测定,证实融合型表达载体pET-Nus-PTEN构建成功.转化表达宿主BL21(DE3)后,IPTG诱导表达.经12%SDS-PAGE凝胶电泳,获得118kD的特异蛋白条带,目的蛋白占细菌总蛋白的17%.结果表明:PTEN基因和Nus基因融合表达成功,获得可溶性Nus-PTEN蛋白.该研究为PTEN蛋白的抑癌机理和基因工程药物的研究打下了基础,这是国内PTEN蛋白在原核细胞中成功表达的首次报道.

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关键词

prokaryotic expression plasmid,suppressor gene

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