斑马鱼心脏发育候选基因Klhl31的TALEN打靶有效性分析
Acta Laser Biology Sinica（2016）
Abstract
TALEN(transcription activator-like effector nuclease)打靶是一种定向敲除基因技术,利用该技术能解决目前在斑马鱼体内难以进行基因敲除的难题.Klhl31是本实验室鉴定的人类心脏发育候选基因,且目前国内外尚无斑马鱼Klhl31敲除品系.为了在斑马鱼的整体水平鉴定Klhl31的生物学功能,我们利用TALEN打靶技术建立斑马鱼KlHl31基因敲除品系.酶切验证的结果显示,注射了TALEN表达质粒的胚胎在酶切位点处发生了基因突变,该突变破坏了酶切位点导致酶切出现阳性结果,证明了TALEN打靶的有效性.对F0代突变体成鱼的筛选过程中,经酶切验证,同样出现了阳性结果.这些结果说明用TALEN这种技术成功敲除了斑马鱼Klhl31基因,获得了Klhl31基因敲除的嵌合体斑马鱼.
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Key words
Klhl31,TALEN,gene mutations,restriction sites,gene knockout
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