重组人bFGF的原核表达及功能分析

为研究重组人碱性成纤维细胞生长因子(human basic fibroblast growth factor,bFGF)的原核表达及纯化条件,并分析其功能,该研究根据bFGF基因序列,优化密码子,构建pET-28a原核表达载体,经IPTG诱导,SDS-PAGE电泳分析验证,采用Ni柱进行分离纯化目的蛋白bFGF.培养NIH3T3细胞、HEK293细胞及CHO细胞,并进行CCK-8实验检测蛋白活性.结果 显示,成功构建原核表达载体.经电泳分析,在l mmol/L IPTG诱导条件下,成功表达目的蛋白bFGE表达量约占菌体蛋白量32％,蛋白纯度约为96％.活性检测结果显示,ED50分别为5.97 ng/mL、4.21 ng/mL、6.71 ng/mL,可以有效促进NIH3T3细胞、HEK293细胞及CHO细胞增殖.该研究得出,经原核表达系统成功表达人bFGF蛋白且其活性较高.