携带线粒体CO1/tRNASer(UCN)7444G>A突变和12SrRNA 1555A>G突变的非综合征性耳聋家系的线粒体功能研究

该研究通过构建携带突变的血小板融合细胞系,探讨12S rRNA 1555A>G和CO1/ tRNASer(UCN) 7444G>A突变对线粒体功能的影响.首先,采集携带12S rRNA 1555A>G和CO1/ tRNASer(UCN) 7444G>A双突变、单突变及正常对照组患者外周血,构建血小板融合细胞系.其次,对构建成功的血小板融合细胞系进行一系列功能研究,包括细胞内活性氧类(ROS)生成量、线粒体膜电位水平、蛋白质水平和tRNA稳态水平的分析.通过对各组血小板融合细胞系的线粒体功能的研究,结果与对照组相比发现,细胞内ROS生成量显示,仅携带m.1555A>G单突变组细胞ROS上升 66.54％,仅携带m.7444G>A单突变组细胞ROS上升83.09％,而同时携带m.1555A>G和m.7444G>A双突变组细胞ROS上升131.08％;线粒体膜电位水平显示,m.1555A>G单突变组的ΔΨm水平下降32.86％,m.7444G>A单突变组的ΔΨ水平下降0.66％,m.1555A>G和m.7444G>A双突变组的ΔΨm水平下降29.86％;Western blot结果显示,各突变样本的CO1、CO2均有不同程度的下降,仅携带m.1555A>G单突变组中ND4、ND5和ND6差异不明显,而仅携带m.7444G>A单突变组和m.1555A>G和m.7444G>A双突变组中ND4、ND5和ND6均有不同程度的下降;Northern blot结果显示,m.7444G >A对tRNASer(UCN)稳态水平的改变并不是很明显.提示CO1/tRNASer(UCN) 7444G>A突变可能只是12S rRNA 1555A>G突变的病理效应的修饰因子,但在耳聋的发生过程中,还是12S rRNA 1555A>G突变起主导作用.