p85a基因对人神经母细胞瘤SY5Y细胞迁移的影响

通过干扰p85a基因的表达,探讨其在人神经母细胞瘤SY5Y细胞迁移中的作用及对mRNA和蛋白质水平的影响.首先,构建p85a基因的干扰质粒siRNA质粒(si-p85a)和过表达质粒(OE-p85a),转染人神经母细胞瘤SY5Y细胞,48h后,用定量PCR方法检测p85a基因的mRNA水平变化;Western blot检测其蛋白质水平变化;用流式细胞术检测细胞周期变化;随后,将si-p85a、OE-p85a等质粒转染12孔板中的细胞,分别在24、48、72 h时做划痕实验,观察细胞迁移的变化.定量PCR显示,与MOCK组相比,不同组p85a基因表达有差异.干扰质粒(si-p85a)组表达降低,约为对照组的0.42倍;而过表达(OE-p85a)组表达明显升高,为对照组的22.84倍,均有显著性统计学差异(P＜0.05).Westem blot结果显示,转染si-p85a质粒后,p85a蛋白质水平下降;而转染OE-p85a质粒,p85a蛋白质水平升高.划痕实验中,转染OE-p85a可促进SY5Y细胞迁移,转染si-p85a后抑制细胞迁移,均有统计学差异(P＜0.05).实验结果表明,在SY5Y细胞生长过程中,p85a基因起到重要作用,可以促进SY5Y细胞迁移运动.