阿司咪唑对宫颈癌细胞HeLa自噬的影响

该研究利用蛋白质免疫印迹法(Western blot)、稳定表达mCherry-EGFP-LC3B(microtubule-associated proteins 1A/1B light chain 3B,LC3)自噬双标荧光细胞、mt-Keima荧光探针活细胞扫描技术在人宫颈癌细胞HeLa中检测了多种自噬相关标志物,探究了阿司咪唑(astemizole,AST)对HeLa细胞自噬的影响.结果表明,阿司咪唑在HeLa细胞中引起自噬标志蛋白质LC3-II与SQSTMl/p62的显著累积,并存在剂量和时间依赖性效应;阿司咪唑导致HeLa细胞存活率显著降低;用自噬抑制剂 Bafilomycin Al(Baf-Al)阻断自噬流(autophagic flux)后,再加入阿司咪唑不能促进LC3-II进一步累积;阿司咪唑处理细胞后自噬体与自噬溶酶体的数量均显著增加;此外,阿司咪唑显著抑制了线粒体氧化磷酸化解偶联剂羰基氰化物间氯苯腙(carbonyl cyanide 3-chlorophenylhydrazone,CCCP)导致的线粒体标志蛋白质TOMM20(translocase of outer mitochondrial membrane 20)的降解,其线粒体自噬水平显著低于对照组.以上结果证明了阿司咪唑有抑制自噬流的作用,导致损伤的线粒体不能被顺利降解,并且提示该作用可能是通过抑制溶酶体功能实现的.