人HMG盒转录因子1基因shRNA质粒的构建及其功能鉴定

目的 构建人HMG盒转录因子1(HMG-box transcription factor 1,HBP1)基因shRNA质粒,并探讨该基因的相关功能.方法 合成HBP1基因干扰序列,将其插入至慢病毒表达载体pLL3.7中,构建重组质粒pLL3.7-shHBP1,经TurboFectTM脂质体介导转染HEK293T细胞,收集含病毒的培养基,分别感染HeLa及HepG2细胞,经puromycin持续筛选,获得稳定转染细胞株.Real-time PCR及Western blot法分别检测HeLa及HepG2细胞中HBP1基因mRNA转录及蛋白表达水平,MTr及流式细胞术分别检测HBP1基因抑制对HeLa细胞增殖及凋亡的影响.结果 经测序鉴定,重组质粒pLL3.7-shHBP1构建正确.HeLa及HepG2细胞中HBP1基因mRNA转录及蛋白表达水平均明显下调(P＜0.01);HBP1基因抑制后,HeLa细胞的增殖速度明显加快(P＜0.01),细胞凋亡明显减少(P＜0.01).结论 成功构建了HBP1基因shRNA质粒,抑制HBP1表达后可使HeLa细胞的增殖速度加快,细胞凋亡减少.本实验为HBP1基因相关功能的进一步研究奠定了基础.